5-8F人鼻咽癌細(xì)胞

5-8F人鼻咽癌細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法
傳代前準(zhǔn)備--胰蛋白酶消化--吹打分散細(xì)胞--分裝稀釋細(xì)胞--繼續(xù)培養(yǎng)
1) 將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊的培養(yǎng)液棄掉, 然后用D-Hanks液洗兩次,(一定要洗干凈,以免影響胰酶的消化作用)。
2) 加入0.25%胰酶-EDTA消化,25cm培養(yǎng)瓶加0.4ml, 37度消化5min,鏡下看到細(xì)胞變圓,間隙增大。
3)立即加含10%FCS的培養(yǎng)液終止消化,用細(xì)胞刮刀輕刮,注意,這時(shí)候用吸管吹不下來(lái),但是刮刀卻很容易刮下來(lái),而且對(duì)細(xì)胞的損傷極小。
4)離心,棄上清,加新的培養(yǎng)液(10%FCS),小心吹勻,分裝入新的培養(yǎng)瓶。
傳代5-8F人鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
1、不要輕易改變培養(yǎng)液，我曾經(jīng)把MEM換成1640后，細(xì)胞傳幾代后莫名其妙死亡。
2、如果想節(jié)省消化液，上面第2步可換成3-5mlDPBS洗，主要是去除培養(yǎng)瓶里會(huì)影響消化液作用的成分。
3、自配消化液一定要調(diào)PH（=7.8-8）值，并且注意分裝，-20度保存，避免反復(fù)凍融，用前37度預(yù)熱，消化較好較快。
4.嚴(yán)格的無(wú)菌操作
5.適度消化：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過(guò)程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
5-8F人鼻咽癌細(xì)胞附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二鈉）消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g， KCl 0.20g， KH2PO4 0.02g， 葡萄糖 2.00g，0.5％酚紅4ml，加入蒸餾水定容至1000ml。10磅20min高壓滅菌，使用時(shí)調(diào)節(jié)PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要*清洗，否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。
售后服務(wù)告知書
一、 收到細(xì)胞處理方法
1、 收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。
2、 收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞。
3、 收到細(xì)胞后，可將培養(yǎng)瓶里多余的培養(yǎng)基收集放置于4℃?zhèn)溆?。剛開始培養(yǎng)時(shí)，建議用瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，可補(bǔ)加2%的血清，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后，培養(yǎng)液一半用瓶?jī)?nèi)的，一半用客戶自備的，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
二、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
1、 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2、 細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品24小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；
3、 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；
4、 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；
5、 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
6、 細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力），核實(shí)后予重發(fā)；
7、 視具體情況而定。
三、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
1、 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2、 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3、 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4、 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5、 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)；
6、 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知的，不重發(fā)；
7、 視具體情況而定。
四、其他服務(wù)政策
1、 細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題后，未能及時(shí)反饋并提交細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題反饋表的，不能免費(fèi)重發(fā)，如需重發(fā)，客戶需支付購(gòu)買價(jià)7.0折的費(fèi)用。
2、 如客戶收到細(xì)胞8-30天之內(nèi)，因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染，我公司可以7.0折優(yōu)惠價(jià)重新提供該細(xì)胞株。