HCT-8人回盲腸癌細(xì)胞
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞來(lái)源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍?時(shí),應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真或E-mail致銷售人員,我們將盡快為您解決。
HCT-8人回盲腸癌細(xì)胞
"細(xì)胞培養(yǎng)三不要:
養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下:
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話,你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。細(xì)胞(當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。
2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言,養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)纬捎欣谏L(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長(zhǎng)。
3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候,初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度,早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來(lái),用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,37度消化過(guò)夜,細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,動(dòng)作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。
細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn):
無(wú)菌意識(shí)要強(qiáng):實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70 % ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。
無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置,其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約 45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻(xiàn)可能對(duì)相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時(shí),我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí),一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多,且會(huì)影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對(duì)細(xì)胞的影響