SF126人腦瘤細胞
根據(jù)細胞生長的特點,傳代方法有3種:
(1)懸浮生長細胞傳代
離心法傳代:離心(1000轉(zhuǎn)/分)去上清,沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。
直接傳代法:懸浮細胞沉淀在瓶壁時,將上清培養(yǎng)液去除1/2-2/3,然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。
(2)半懸浮生長細胞傳代(HeIa細胞)
此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象,但貼壁不牢,可用直接吹。
打法使細胞從瓶壁脫落下來,進行傳代。
(3)貼壁生長細胞傳代
采用酶消化法傳代,常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。xy-6437R ANKRD53錨蛋白重復域53抗體
SF126人腦瘤細胞
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基,第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)
貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加適量0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間)
2.鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?,加6~8ml *培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存