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產(chǎn)品名稱:

ONS-76人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-30
ONS-76人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。

產(chǎn)品概述

ONS-76人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞

"購買細(xì)胞注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通交流。

"細(xì)胞培養(yǎng)三不要:

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會有一點(diǎn)越用越堿,因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細(xì)菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對于初學(xué)者而言,養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對細(xì)胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,細(xì)胞老是長不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候,初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度,早早地終止消化。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,37度消化過夜,細(xì)胞也沒事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,對細(xì)胞的傷害也是很大的。" 詳見細(xì)胞說明書

 凍存條件: 詳見細(xì)胞說明書

主要文獻(xiàn): 請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

ONS-76人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:

傳代培養(yǎng):是指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉(zhuǎn)移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞,可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代,部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。

實(shí)驗(yàn)步驟:① 入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;

② 倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱。

③ 超凈臺臺面應(yīng)整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;

④ 打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關(guān)閉紫外燈,打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧;

⑤ 點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)。

⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。

⑦ 倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下。

⑧ 每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,小培養(yǎng)瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。

⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋,適度擰緊后稍回轉(zhuǎn),以利于CO2的進(jìn)入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。

⑩ 對懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,步驟7-9不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。

注意事項(xiàng)

① 傳代培養(yǎng)時(shí)注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材。

② 每天觀察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時(shí)即可傳代。

③ 如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。

傳代細(xì)胞的建系和維持:細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實(shí)現(xiàn)。

對每一個細(xì)胞系來說都有其自身的特點(diǎn),要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作。

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